硬安排的病理观测关于研讨骨骼、牙齿等器官疾病的开展具有很重要的含义。可是硬安排因为其自身硬度大难以被传统的薄片切开机直接切开，因而在切开之前往往需求脱钙处理，使其软化以到达刀片所可接受的硬度范围内进行切开。可是钙质作为骨骼和牙齿的组成部分，进行脱钙将不可避免的丢失所研讨器官中的信息，尤其是在含钙量高的牙釉质等部位中。一起，钙在前期硬安排愈合如牙质修正、骨伤口愈合等过程中也起着及其重要的效果。别的脱钙还不可避免的改变了硬安排的描摹，比如厚度改变、褶皱、软硬安排别离等问题。因而寻觅无需脱钙的切开办法关于研讨硬安排研讨是非常必要的。

  跟着激光技能的开展，这一难题有望得到解决。关于刀片切开来说，遭到刀片资料自身的约束，无法切开比刀片更硬的物体，可是这个困难在激光切开中并不存在 。但是激光切开也有其缺陷：先作为一种高能光束，其自身包含的能量较高简略灼伤物体外表，然后影响切开效果；别的遭到激光在穿透物体时将不可避免的被所穿透物体中的组分散射，然后约束了激光切开的深度。近几年开展较为敏捷的双光子聚集技能给激光3D切开带来了新的或许。

  3D切开；别的双光子一般都会选用近红外激光作为激发光源，这类激光往往具有佳穿深而且关于蛋白的吸收较低，根本不会灼伤样品。后双光子切开比较于传统打磨办法来说更为，样品的丢失更少。

  在制样上来说，双光子切开也非常的简略。依据现在文献上主要是选用的办法可以总结为：先运用醛固定，然后运用PMMA包埋，接下来运用双光子激光切开设备切开，通过简略打磨后，就可以染色压片了。这比起传统的硬安排切开过程更简略，制备时刻更短。而且制备效果比传统办法更优。

  小鼠胫骨的SEM图画。A.Phospho1敲除（KO）的胫骨近端显现非矿化基质类骨；B. 胫骨主干。白色箭头显现骨髓内外表的骨样斑块。黑色箭头显现坐落皮质血管的骨样区（向下至20-50 lm区域）的巨细改变；C. 膝盖。细密纤维结缔安排骨膜坐落白色箭头处；D.WT的对照关节。

  节段性残缺愈合的安排形态学点评。a-d。Safranin Orange/von Kossa染色观测修正手术愈合效果的胫骨代表性图片，LA，外侧；ME，内侧；PR，近端；DI，远端，对侧钢板。e.手术后周内收集的对照样本作标本图片。自体松质骨移植（ABG）对蜂巢的增强效果黑色（蓝色星）和支架中心孔内显着的截骨术血肿（白色星）依然可见。

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